ctDNA 會攜帶來源于腫瘤細胞相關(guān)的遺傳學(xué)特征，如基因突變、甲基化、擴增或重排等，因此ctDNA具有多種潛在的臨床應(yīng)用，包括用于疾病篩查、分析早期疾病的特征、治療后檢測分子殘留病灶（MRD）、預(yù)測復(fù)發(fā)、對晚期癌癥進行基因分型、早期評估治療效果、監(jiān)測反應(yīng)和識別耐藥機制（圖1）。

圖1.癌癥患者ctDNA檢測的臨床應(yīng)用和疾病不同階段的預(yù)期DNA水平

用于ctDNA分析的采血時間應(yīng)根據(jù)臨床問題仔細選擇，因為不同的因素會影響ctDNA的釋放（例如，接受治療、并發(fā)炎癥過程、手術(shù)）。對于手術(shù)后檢測MRD，理想情況下應(yīng)該發(fā)生在術(shù)后至少1周，對于愈合時間較長的大手術(shù)，可能發(fā)生在2周或更長時間。對于檢測晚期癌癥基因分型，在積極治療有反應(yīng)或治療緩解的腫瘤時應(yīng)避免采血，以最大限度地減少假陰性結(jié)果。

根據(jù)處理時間和檢測方法謹慎選擇血液樣本的采集管，如STRECK管或EDTA采血管。

如果血漿樣本暫不進行 ctDNA 提取，應(yīng)在-80℃ 長期儲存，使溫度變化最小，并盡可能減少反復(fù)凍融。

假陰性（實際存在于腫瘤中時無法識別感興趣的突變）是ctDNA分析的一個重要問題，可能是由于所分析的血漿DNA水平較低、檢測靈敏度不足或未從腫瘤中脫落所致。

CHIP是ctDNA測試中假陽性的常見原因，在詢問通常含有克隆性造血（CHIP）突變的基因時，對于臨床可操作的腫瘤抑制基因檢測，如DNA修復(fù)基因，建議同步檢測血漿DNA和白細胞DNA。對于這樣的檢測，建議常規(guī)采集接受血漿ctDNA檢測的患者的白細胞，以便在必要時有可用的樣本來排除CHIP。

癌癥易感基因中的致病胚系突變可以在ctDNA（如BRCA1、BRCA2、PALB2）中被檢測到，而對這些變異的檢測需要進行體細胞突變還是胚系突變的驗證試驗。

臨床基因分型分析在未來應(yīng)該需要達到能夠評估腫瘤純度的水平，以允許對未檢測到的結(jié)果進行預(yù)測，并允許真陰性預(yù)測。這可以通過信息學(xué)分析實現(xiàn)，例如通過在足夠高的基因比例下檢測突變，或進行交叉純度分析檢測某種腫瘤，以排除CHIP的影響。

01

液體活檢有較高的可分析性以及臨床特異性，對于有意義的陽性結(jié)果，可能會用于常規(guī)臨床實踐。但是必須考慮到ctDNA檢測的局限性。

02

考慮到液體活檢的優(yōu)勢——快速以及檢測的方便，建議在組織基因檢測前進行一次液體活檢，尤其是對于那些晚期腫瘤以及無法進行組織活檢的患者。

03

當(dāng)腫瘤進展時，無論是未經(jīng)治療或者經(jīng)過一線治療后，應(yīng)該采集用于液體活檢的標(biāo)本。當(dāng)腫瘤對藥物反應(yīng)時，樣本ctDNA檢測的敏感性就下降了。

04

對于晚期癌癥的基因檢測，臨床實踐中 RT-PCR、數(shù)字 PCR 和 NGS 檢測之間的選擇應(yīng)根據(jù)腫瘤特異性背景下的可用性和可治療的基因突變數(shù)量來決定。

05

應(yīng)該謹慎解釋ctDNA檢測到的腫瘤易感基因（如BRCA1/2，PALB2）；應(yīng)該通過檢測區(qū)分體細胞突變和胚系突變。

06

鑒于一定的臨床敏感性和陰性預(yù)測值，未檢測到可治療的基因突變的液體活檢結(jié)果應(yīng)提示進行再次組織檢測。對于專家來說，如果可以確認樣本中存在足夠的 ctDNA 純度，則可以不需要進行再次檢測。

07

ctDNA 檢測對基因融合和拷貝數(shù)的敏感性較低，如果可行，應(yīng)在組織中檢測這些突變。

08

所有腫瘤醫(yī)生都應(yīng)該有機會接觸分子腫瘤委員會，在早期接受教育以確保對結(jié)果的正確解釋，并討論疑難病例以確保做出適當(dāng)?shù)臎Q定。